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質粒構建實驗影響因素有哪些？

質粒構建是指選定的目的外源基因（DNA）先要經(jīng)過PCR擴增。隨后用限制性內切酶分別切割載體和外源DNA片段，再使用DNA連接酶將切割后的載體與DNA片段連接，轉入宿主細胞。最后經(jīng)過篩選鑒定出正確的重組克隆質粒，實現(xiàn)目的基因在宿主細胞內的正確表達。那么質粒構建實驗影響因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、載體的選擇在選擇克隆載體時應注意以下幾點：①具有自主復制能力，拷貝數(shù)高；②攜帶易于篩選的選擇標記；③含有多種限制酶的單一識別序列，以供外源基因插入；④載體應盡可能?。ǎ?5kb...

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影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些？

熒光原位雜交是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術。那么影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、固定液的選擇及固定時間①石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定12～48h，其它固定液對實驗結果可能產(chǎn)生一定的影響。②組織標本離體后應盡快固定，較大標本切開固定。如樣本固定不及時，熒光信號會減弱。（尤其環(huán)境溫度較高時更應及時固定）③固定液體積應不少于標本體積的10倍，否則固定不...

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流式細胞周期檢測的常見問題有哪些？

你知道流式細胞周期檢測的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣本制備注意事項1.根據(jù)不同的檢測細胞調整合適的溫度、濕度、酸堿度等培養(yǎng)環(huán)境，注意一定要無菌的環(huán)境培養(yǎng)。2.培養(yǎng)細胞時，以對數(shù)期處理為宜，避免細胞量過少導致收集細胞量不足或者細胞量過多導致細胞開始大量死亡造成的實驗誤差。3.流式檢測細胞周期上機檢測所需收集細胞量較多，收集細胞時盡量多收集一些4.流式檢測對細胞離心，重懸次數(shù)較多，注意動作輕緩，避免過多地損傷、弄破細胞。5.本實驗對細胞離心，重懸次數(shù)較多，注意動作...

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【干貨】一文了解vero細胞培養(yǎng)全流程

Vero細胞系是連續(xù)非整倍體細胞，連續(xù)細胞系可以經(jīng)過多次分裂而不衰老，非整倍體是指細胞中的染色體數(shù)目與通常的不同。與其它普通哺乳動物細胞不同，Vero細胞還有干擾素分泌缺陷的特點，當被病毒感染時，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對于其它來源的干擾素仍有正常的反應。一、基本信息細胞名稱：Vero非洲綠猴腎細胞細胞別稱：VERO;Verdareno細胞形態(tài)：上皮細胞樣生長特性：貼壁生長組織來源：正常腎培養(yǎng)基：MEM+10%FBS+1%PS生長條件：①氣相：...

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原代細胞培養(yǎng)的分離注意事項有什么？

分離是原代細胞培養(yǎng)的重要步驟之一，那么你知道原代細胞培養(yǎng)的分離注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、組織塊培養(yǎng)法1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2.加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3.當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質會影響原代細胞的生長。4.為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前...

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