技術(shù)文章
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哺乳動物細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染能在短期內(nèi)快速表達(dá)高活性蛋白而被廣泛應(yīng)用。那么細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染的原理是什么?讓我們一起來看看吧!哺乳動物細(xì)胞自身具有蛋白折疊和翻譯后修飾的功能,獲得的蛋白更具有天然活性。哺乳動物細(xì)胞生產(chǎn)蛋白的方式有兩種:瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染的特點(diǎn)是短期快速表達(dá),滿足蛋白的小量制備。而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系能夠滿足蛋白的大量、長期生產(chǎn)。瞬時轉(zhuǎn)染的原理是指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細(xì)胞內(nèi),該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。隨著細(xì)胞的生長分裂,...
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酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,簡寫ELISA或ELASA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。那么ELISA主要材料試劑有哪些呢?讓我們一起來看看吧!一、抗原和抗體在ELISA實施過程中,抗原和抗體的質(zhì)量決定實驗是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高,抗體效價高、親和力強(qiáng)。ELISA所用抗原有三個來源:天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物...
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酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,簡寫ELISA或ELASA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。那么你知道ELISA的常見問題有哪些?解決方法是什么嗎?讓我們一起來看看吧!一、高背景或陰性對照只偏高原因:1.陰性對照孔被陽性對照貨樣品污染2.抗體非特異性結(jié)合3.酶結(jié)合物過濃4.孵育溫度過高解決方法:1.洗滌是,勿將洗液溢出孔外2.封閉液不合適,更換封閉液3.請...
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PCR引物是人工合成的一段寡聚核苷酸。引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,因此,PCR的首要任務(wù)就是引物設(shè)計。那么你知道PCR引物設(shè)計的關(guān)鍵點(diǎn)有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!一、引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計DNA序列的保守區(qū)是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因,通過序列分析軟件(比如DNAman)比對(Alignment),各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。二、引物長度一般在15~30堿基之間引物長度(primerlength)常用的是18-...
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DNA分子是一種自身不會發(fā)出熒光的大分子,需要相應(yīng)的核酸分子染料結(jié)合到DNA分子的大溝處,通過激發(fā)光激發(fā)DNA–核酸染料復(fù)合物,復(fù)合物會發(fā)出一束強(qiáng)熒光,通過相應(yīng)的濾光片過濾得到單波長的發(fā)射光,通過照相機(jī)或者肉眼捕獲就能夠檢測到相應(yīng)的DNA分子。那么瓊脂糖核酸電泳要選擇紫外還是藍(lán)光呢?讓我們一起來看看吧!從核酸電泳發(fā)展至今,絕大多數(shù)的分子生物學(xué)實驗室選擇溴化乙錠(EtBr,也簡稱EB)作為核酸分子染料,由于EB的光譜特性,又不得不選擇紫外光作為激發(fā)光。EB分子因其分子量較小,容...
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