一、細(xì)胞復(fù)蘇的原理

細(xì)胞復(fù)蘇的原理是基于將細(xì)胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復(fù)活力的技術(shù)。遵循“快融"原則，短時間內(nèi)融化胞外結(jié)晶，避免緩慢融化導(dǎo)致水分滲入胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶損傷細(xì)胞，融化越快，細(xì)胞損傷越小。

二、細(xì)胞復(fù)蘇的小Tips

1. 為防止凍存管在水浴鍋中升溫時突然爆炸，可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。

2. 從液氮罐里拿出細(xì)胞不必急于放入水浴鍋中，因為細(xì)胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個過程對細(xì)胞是沒有損害的，我們有足夠的時間處理。但是，一旦細(xì)胞融化，應(yīng)立即將其轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備的培養(yǎng)基中，以稀釋細(xì)胞凍存液中的DMSO，因為在常溫下高濃度DMSO對細(xì)胞的損害較大。

3. 解凍細(xì)胞時不必等待細(xì)胞完quan融化才從水浴鍋中取出，當(dāng)觀察到冰塊浮起來即可。此外，水浴時間應(yīng)盡量不超過1分鐘，整個解凍過程盡量在3分鐘內(nèi)完成

4. 將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中時，應(yīng)確保操作迅速并避免污染。通過這些注意事項和技巧的應(yīng)用，可以有效地提高細(xì)胞復(fù)蘇的成功率和細(xì)胞的活力。我們首先將已經(jīng)融化的部分轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的離心管中。接著，從離心管中吸取少量的培養(yǎng)基到凍存管中。這時，剩余的冰塊會迅速融化。然后，我們將這些融化后的液體全部轉(zhuǎn)移回離心管，進行離心，以去除上清液（這樣做是為了去除DMSO）。之后，我們加入新鮮的培養(yǎng)基，輕輕搖晃，使其混合均勻，然后接種到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。細(xì)胞復(fù)蘇后，對于貼壁細(xì)胞，復(fù)蘇24小時后，我們會在顯微鏡下觀察。如果細(xì)胞的密度達(dá)到了80%，那么就可以進行正常的傳代培養(yǎng)。如果密度還沒有達(dá)到80%，那么我們就會繼續(xù)培養(yǎng)，直到48小時后再進行換液。

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