酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。

Elisa的檢測(cè)方法有哪些？讓我們一起來(lái)看看吧！

常見的有直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法基雙抗夾心法，其中直接法和競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用較少，應(yīng)有最多的是雙抗夾心法，讓我們一一來(lái)看看它們是如何操作的吧！

一、直接法

將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測(cè)抗原。相較于其他類型的ELISA實(shí)驗(yàn)，直接ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測(cè)速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，檢測(cè)結(jié)果不容易出錯(cuò)，但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會(huì)與ELISA版結(jié)合，實(shí)驗(yàn)背景會(huì)比較高，而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實(shí)驗(yàn)不太靈活。另外由于沒(méi)有使用二抗，信號(hào)沒(méi)有被放大，降低了測(cè)定的靈敏度。

二、間接法

將抗原固定于ELISA班上，隨后分兩步進(jìn)行檢測(cè)：首先加入檢測(cè)抗體于抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)二抗檢測(cè)并利用底物顯色。于直接ELISA相比，間接ELISA用到酶標(biāo)二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標(biāo)記抗體，更經(jīng)濟(jì)，間接ELISA還提供了更大的靈活性，該方法的缺點(diǎn)有：存在交叉反應(yīng)的可能性（酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合），可能會(huì)增加背景，同時(shí)與直接ELISA相比，間接ELISA實(shí)驗(yàn)多了二抗孵育的步驟，實(shí)驗(yàn)周期延長(zhǎng)。

三、夾心法

被檢測(cè)的抗原包被再兩個(gè)抗體之間其中一個(gè)抗體將抗原固定于載體上，即捕捉抗體，另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量，或不標(biāo)記，再透過(guò)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量，這兩種抗體必須小心選取，才可以避免交互反應(yīng)貨競(jìng)爭(zhēng)相同額抗原結(jié)合部位。

四、競(jìng)爭(zhēng)法

預(yù)先將抗原包被再固相載體上，并加入酶標(biāo)記的特異性抗體，實(shí)驗(yàn)是，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原于預(yù)先包被再固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體，如果待檢測(cè)物是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被再固相載體上的抗原，通過(guò)洗滌洗掉被競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的酶標(biāo)抗體，最后加底物顯色，需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。競(jìng)爭(zhēng)法相對(duì)以上的三種方法更復(fù)雜一些，但以上三種方法都適用于競(jìng)爭(zhēng)法，其主要有點(diǎn)在于可檢測(cè)不純的樣品，且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高，但存在整體敏感性和專一性較差的問(wèn)題。

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